| 초록 |
본 연구개발사업의 목적: ▪ 항체 Fc공학 플랫폼 기술을 이용하여 활성화 카지노 미국RIIIa에 높은 친화도를 보이는 무당화 항체 Fc 변이체들을 발굴 ▪ 무당화 항체 Fc 변이체를 이용한 암세포 사멸 효과를 유도 ▪ 당화 비균질성 문제가 없고 박테리아에서도 생산이 가능한 무당화 치료용 항체 개발 연구방법: ▪ 활성화 카지노 미국RIIIa에 높은 친화도를 보이과 면역세포 활성화가 가능한 치료용 항체로 방향적 진화 (directed evolution)시키기 위해 거대 Fc 변이체 라이브러리를 구축하였음. ▪ Fc 변이체 탐색, 카지노 미국R 결합력 분석, pH-의존 FcRn 결합력 분석을 위해 Fc 수용체들(카지노 미국RI, 카지노 미국RIIa, 카지노 미국RIIab, 카지노 미국RIIIa, FcRn)을 발현 및 정제하였음. ▪ 유세포 분리기 (flow cytometry)를 이용한 고속 탐색을 위해 정제된 카지노 미국RIIIa를 형광 표지화 하였음. ▪ 구축된 거대 Fc 변이체 라이브러리를 항체 Fc 변이체 디스플레이 시스템과 유세포 분석기(flow cytometry)를 활용하여 고속 탐색하였음. ▪ 카지노 미국R (카지노 미국RI, 카지노 미국RIIa, 카지노 미국RIIb, 카지노 미국RIIIa)과 FcRn 결합력 및 특이성을 ELISA 및 SPR방법으로 분석하였음. ▪ PBMCs (Pheripheral blood mononuclear cells)를 작용세포로 하는 ADCC (antibody dependent cell-mediated cytotoxicity) 분석을 통하여 항체 Fc 변이체의 암세포 사멸 효능을 검증하였음. 연구결과: ▪ IgG 항체 Fc 변이체 탐색과 분석에 이용할 Fc 수용체들 (카지노 미국RIIa, 카지노 미국RIIb, 카지노 미국RIIIa,FcRn)이 동물세포에서 성공적으로 발현 및 정제되었고, 카지노 미국RIIIa를 형광 분자로 표지화 한후 활성 확인을 완료하였음. ▪ 향상된 카지노 미국RIIIa 결합을 위해 Fc거대 라이브러리 Fc 변이체 라이브러리 (라이브러리 크기 109)가 성공적으로 구축되었으며, 박테리아 디스플레이와 유세포 분리기를 이용한 고속탐색으로 카지노 미국RIIIa에 대한 결합력이 월등히 증가된 무당화 항체 Fc 변이체를 선별하였음. ▪ 선별된 무당화 항체 Fc 변이체를 포함한 trastuzumab은 glycosylation이 없어도 당화 야생형 trastuzumab이나 임상에 사용 중인 clinical grade Herceptin에 비해 카지노 미국RIIIa에 대한 결합력이 높은 것을 확인하였음. ▪ 발굴된 Fc 변이체를 포함한 trastuzumab 항체는 다양한 카지노 미국Rs (카지노 미국RIIa, 카지노 미국RIIb, 카지노 미국RIIIa)에 결합을 하였고, 우수한 pH-의존 FcRn 결합력을 보이는 것을 확인하였음. ▪ PBMCs를 이용한 ADCC 분석을 통해 발굴된 무당화 항체 Fc 변이체의 암세포 사멸 효능 검증하였으며, 발굴된 무당화 trastuzumab Fc 변이체는 glycosylation이 없어도 강력한 PBMCs에 의한 ADCC 작용기작을 유도할 수 있음을 확인하였음. ( 출처 : 요약문 4p ) |
